PACAP deficiency aggravates atherosclerosis in ApoE deficient mice

Pituitary Adenylate Cyclase-Activating Polypeptide (PACAP) plays an important role in cytoprotection, inflammation and cardiovascular regulation. Thus, we studied the involvement of PACAP in atherogenesis. Differentiated human THP-1 macrophages (MΦ) were stimulated with oxidized low-density lipoproteins (oxLDL) and the influence of PACAP38 treatment on lipid content and TNF release was determined. To test the effect of PACAP deficiency (PACAP^?/?) on the development of atherosclerosis under standard chow (SC) or cholesterol-enriched diet (CED) in vivo, PACAP^?/? mice were crossbred with ApoE^?/? to generate PACAP^?/?/ApoE^?/? mice. Blood cholesterol and triglyceride levels were quantified. Lumen stenosis in the brachiocephalic trunk, cellularity and amounts of pro-inflammatory as well as autophagy-, apoptosis- and necroptosis-relevant proteins were analysed in atherosclerotic plaques by quantitative immunohistochemistry. In vitro, PACAP38 inhibited oxLDL-induced intracellular lipid storage as well as TNF release in MФ. In vivo, after SC, but not under CED, PACAP^?/?/ApoE^?/? mice showed an increased lumen stenosis compared to ApoE^?/? mice. In atherosclerotic plaques of PACAP^?/?/ApoE^?/? mice, the immunoreactive areas of TNF⁺, IL-1β⁺, autophagic, apoptotic and necroptotic cells were increased. In contrast, the overall cell density was decreased compared to ApoE^?/? under SC, while no differences were seen under CED. Similar plasma cholesterol levels were observed in PACAP^?/?/ApoE^?/? and ApoE^?/? mice under the respective feeding regime. Thus, PACAP^?/-/ApoE^?/? mice represent a novel mouse model of accelerated atherosclerosis where CED is not required. Our data indicate that PACAP acts as an endogenous atheroprotective neuropeptide. Thus, stable PACAP agonists may have potential as anti-atherosclerotic therapeutics. The specific PACAP receptor(s) mediating atheroprotection remain(s) to be identified.     

多巴胺D2受体基因敲除导致体重减轻以及棕色脂肪PRDM16、UCP1、FAS和ACC的表达变化#br#

目的　以多巴胺D2受体基因敲除（D2KO）小鼠为动物模型,研究D2KO小鼠体重减轻后,棕色脂肪组织（brown adipose tissue,BAT）重量,白色脂肪重量,BAT中含PR结构域蛋白16（PRD1-BF1-RIZ1 homologous domain containing 16,PRDM16）、解偶联蛋白1（uncoupling protein 1,UCP1）、脂肪酸合酶（fatty acid synthase,FAS）以及乙酰辅酶A羧化酶（acetyl Coenzyme A carboxylase,ACC）的mRNA和蛋白表达变化,以期为肥胖机制研究提供线索。 方法　8周龄野生型小鼠组（wild type,WT）和D2KO小鼠组各10只。分别称量各小鼠体重及其白色脂肪、棕色脂肪重量。Real-time quantitative RT-PCR方法检测棕色脂肪中PRDM16、UCP1、FAS、ACC的mRNA表达水平,Western blotting方法检测棕色脂肪中PRDM16、UCP1、FAS、ACC的蛋白表达水平。 结果　WT组动物体重为（23.78±0.54）g,D2KO组动物体重为（20.54±1.15）g,P＜0.05。WT组动物附睾脂肪（epididymal adipose tissue,eAT）重量为（1.083±0.02）g,D2KO组动物eAT重量为（0.978±0.03）g,P＜0.05。WT组动物皮下脂肪（subcutaneous adipose tissue,sAT）重量为（1.85±0.05）g,D2KO组动物sAT重量为（1.72±0.03）g,P<0.05。WT组动物BAT重量为（31.38±4.22）mg,D2KO组动物BAT重量为（42.44±2.47）mg,P<0.05。半定量PCR与Western blotting检测结果显示,相对于WT组,D2KO组小鼠棕色脂肪中PRDM16、FAS、ACC的mRNA与蛋白的表达均显著增加,UCP1的mRNA与蛋白表达显著减少。 结论　D2KO小鼠的体重减轻与棕色脂肪中的PRDM16、UCP1、FAS以及ACC存在一定关联。     

Functional characterization of CEP250 variant identified in nonsyndromic retinitis pigmentosa

Retinitis pigmentosa (RP) is the most common manifestation of inherited retinal diseases with high degree of genetic, allelic, and phenotypic heterogeneity. CEP250 encodes the C‐Nap1 protein and has been associated with various retinal phenotypes. Here, we report the identification of a mutation (c.562C>T, p.R188*) in the CEP250 in a consanguineous family with nonsyndromic RP. To gain insights into the molecular pathomechanism underlying CEP250 defects and the functional relevance of CEP250 variants in humans, we conducted a functional characterization of CEP250 variant using a novel Cep250 knockin mouse line. Remarkably, the disruption of Cep250 resulted in severe impairment of retinal function and significant retinal morphological alterations. The homozygous knockin mice showed significantly reduced retinal thickness and ERG responses. This study not only broadens the spectrum of phenotypes associated with CEP250 mutations, but also, for the first time, elucidates the function of CEP250 in photoreceptors using a newly established animal model.     

注射用益气复脉(冻干)安全性评价

目的 通过豚鼠离体回肠模型及小鼠类致敏实验评价注射用益气复脉（冻干,YQFM）的安全性。方法 建立豚鼠离体回肠模型,依次考察0.2、0.4、0.6、0.8、1.2、1.4、1.6 mg/mL质量浓度的YQFM对静息离体肠、乙酰胆碱（Ach）及组胺（His）诱导的离体肠收缩的抑制率;雄性ICR小鼠随机分为阴性对照组,阳性对照组（C48/80,25 mg/kg）,YQFM低、高剂量（780、3 135 mg/kg,分别为临床等效剂量的0.85和3.43倍）组,分为尾iv含0.4%伊文思蓝（EB）的药液及不含0.4% EB的药液两部分进行体内类致敏反应实验,依次比较各组小鼠耳廓蓝染情况;ELISA法测定血清中His和5-羟色胺（5-HT）的含量;并对耳、肺组织进行HE染色及病理检查。结果 体外实验显示,YQFM既能够抑制离体肠的自主收缩,又能抑制Ach和His导致的离体肠痉挛;体内实验表明,YQFM低剂量组耳廓蓝染率,His、5-HT含量均在正常范围,组织病理检查未见明显异常;3.43倍临床等效剂量时耳廓蓝染率,His、5-HT含量略高,病理结果见轻微炎症反应。结论 YQFM的安全性基本良好,临床使用时需对使用剂量稍加注意,以防轻微不良反应发生。     

免疫细胞治疗产品扩增活化的淋巴细胞的成瘤性研究

目的 研究免疫细胞治疗产品扩增活化的淋巴细胞（EAL）是否具有成瘤性,为其临床应用提供安全性依据。方法 采用BALB/c裸鼠,分为溶媒对照组、阳性对照（Hela细胞）组、EAL低、高剂量（1×10⁷、5×10⁷/只）组,sc给药1次,观察裸鼠临床症状、注射部位有无结节或肿物形成;每周2次称动物体质量;测量肿物体积,绘制生长曲线;肿物组织取出后,HE染色,光镜下进行病理检查。结果 注射后1周内,阳性对照组注射部位均有肿物生长,随着时间的延长体积逐渐增大;自给药后20 d起,阳性对照组雌性裸鼠与溶媒对照组比较,体质量显著增加（P<0.05、0.01）,但身体明显消瘦;病理学检查发现,阳性对照组皮下肿瘤细胞灶状/巢状/团块状增生,肿瘤组织坏死伴炎性细胞浸润、伴或不伴有真皮炎性细胞浸润及出血。EAL低、高剂量组临床症状观察和组织病理学检测均未见肿瘤样病变,体质量增长趋势与溶媒对照组一致。结论 BALB/c裸鼠sc EAL不具有成瘤性。     

不同浓度补肾健脾方对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响

目的:观察不同浓度补肾健脾方含药血清对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响以及不同浓度补肾健脾方对小鼠卵巢组织卵泡颗粒细胞层增殖的影响。方法:采用机械分离法结合胰蛋白酶消化法体外原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,通过HE染色法进行细胞形态鉴定。采用MTT法检测,分别观察含质量分数5%、10%、20%补肾健脾方含药血清对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。体内实验通过给雌性小鼠灌胃不同浓度的补肾健脾方,连续灌胃4周,取卵巢组织做病理形态学观察。结果:质量分数20%、10%、5%的补肾健脾方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖作用各不相同,质量分数20%、10%的含药血清、20%的空白血清对卵巢颗粒细胞的增殖作用最明显,与正常组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。补肾健脾方大剂量、中剂量、小剂量对卵巢卵泡颗粒细胞层的厚度呈现一定的增高趋势。结论:补肾健脾方对小鼠的卵巢颗粒细胞具有一定的增殖作用。     

针刺联合吸入法对阿尔兹海默病模型小鼠的干预作用

目的:观察针刺联合吸入法对阿尔兹海默病模型小鼠的干预作用。方法:选取清洁级SD小鼠60只,随机分为空白组、模型组、吸入组、针刺组、针刺+吸入组,每组12只。空白组常规饲养,充足食水,其余各组分别腹腔注射东莨菪碱3 mg·kg-1,日1次,连续14 d。造模成功后,从第15天开始,吸入组吸入迷迭香精油,针刺组针刺百会、肾俞、血海等穴位,针刺+吸入组给予吸入组和针刺组的治疗方法,连续14 d,末次给药后1 h,旷场实验测试各组小鼠的跨越格数和潜伏期。结果:与模型组比较,吸入组、针刺组第28天旷场实验跨越格数和潜伏期差异有统计学意义(P0.05),针刺+吸入组治疗后第17天、第21天、第28天跨越格数及潜伏期差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:迷迭香精油联合针刺对阿尔茨海默病小鼠有一定的改善作用。     

芪术养生保健袋泡茶对免疫低下小鼠免疫功能的影响

目的:观察芪术养生保健袋泡茶对免疫低下小鼠免疫功能的影响。方法:取ICR小鼠60只,雄性,随机分为正常组、模型组、玉屏风组、袋泡茶高剂量组、袋泡茶中剂量组和袋泡茶低剂量组,每组各10只。正常组和模型组给予等量生理盐水,玉屏风组给予玉屏风口服液0.02m L·g-1,袋泡茶高剂量组给予袋泡茶14.4 g·kg-1,袋泡茶中剂量组给予袋泡茶7.2 g·kg-1,袋泡茶低剂量组给予袋泡茶3.6 g·kg-1。通过芪术养生保健袋泡茶对免疫低下小鼠血液中炭粒吞噬廓清能力、溶血素抗体生成及迟发型超敏(DTH)反应等的影响,观察其对免疫低下小鼠免疫功能的影响。结果:与正常组比较,模型组小鼠吞噬指数K值明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,玉屏风组小鼠吞噬系数较明显降低,芪术袋泡茶各剂量组有升高趋势,差异具有统计学意义(P0.05)。与正常组比较,芪术养生袋泡茶模型组小鼠OD值、绵羊红细胞半数溶血时吸收度值(HC50)明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,芪术养生袋泡茶各剂量组OD值、HC50明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。与正常组比较,模型组小鼠OD值明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,袋泡茶各剂量组OD值明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:芪术养生袋泡茶具有增强免疫低下小鼠血液中炭粒吞噬廓清能力,促进免疫低下小鼠溶血素抗体生成、对免疫低下小鼠的迟发型超敏反应具有增强作用。     

昆仑雪菊水提物对KKAy小鼠血清脂联素、抵抗素、血脂的影响

目的:探讨昆仑雪菊水提物对KKAy小鼠血清脂联素、抵抗素、血脂的影响。方法:将SPF级7~8周龄雄性自发性2型糖尿病KKAy小鼠50只按体质量随机分为模型组(MC组)、昆仑雪菊低剂量组(KD组)、中剂量组(KZ组)、高剂量组(KG组)、吡格列酮组(B组),正常对照组(NC组)选与KKAy小鼠同源的C57BL/6J小鼠10只(NC组)。模型组和正常组给予0.9%氯化钠溶液,其余组给予对应浓度的药液灌胃。35天后取材测血清脂联素、抵抗素、血脂水平。结果:与模型组比较,昆仑雪菊低剂量组脂联素水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05);昆仑雪菊不同剂量组虽比模型组抵抗素水平降低,但差异无统计学意义(P0.05);昆仑雪菊低剂量组高密度脂蛋白(HDL-C)水平提高,差异有统计学意义(P0.05),而总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平无明显降低,差异无统计学意义(P0.05)。结论:昆仑雪菊水提物可能通过提升KKAy小鼠血清脂联素与HDL-C水平而发挥其改善胰岛素抵抗及脂代谢紊乱起作用。